理想的病原体核酸检测方式应该是准确、灵敏、快速、廉价、便携，并且能在各种环境下对任何病原体进行检测。近年来，基于成簇间隔的短回文重复序列及其关联蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins, CRISPR/Cas)的新型分子诊断工具，似乎具有成为这样理想化核酸检测平台的潜力

下一代分子诊断技术！

从1987年首次发现CRISPR, 到最近几年CRISPR-associated(Cas)技术的广泛应用，以及2020年的诺贝尔化学奖颁给了CRISPR的发现者，CRISPR技术被誉为会改变和造福人类的发明。短短几年时间，CRISPR技术成为科研界的热门内容，被称为下一代分子诊断技术！

2020诺贝尔化学奖得主:

Emmanuelle Charpentier教授、Jennifer Doudna教授

赵国屏院士以新冠为例，讲到对于一个“好的”临床检验产品，有5个关键要求：

第一，就是要正确，不能“错怪好人”，不能出现“假阳性；必须准确，不能“张冠李戴”，专一性、特异性要好。第二一定要灵敏，也就是说不能“放过坏人”，不能出现假阴性。第三最好能够“定量”。定量是确定检测结果准确与否的重要佐证。第四，要快速，简便；第五成本要尽可能低。

胡必杰教授表示，赵院士提到的“不抓错好人”、“不放过坏人”，同时定量，让临床医生更加精准地去辨别是感染的病原体还是污染的病原体，同时简捷方便与价优，是非常重要的。如果一项分子诊断技术非常昂贵，很多病人享受不到，只有达到以上五点要求，这项技术才能广泛应用到临床，最终让老百姓和普通病人得益。

等温扩增与CRISPR诊断技术的有机结合

而后赵院士提到，在过去几十年的时间里，等温扩增技术得到了极大的发展，现有也已经开发了很多种方法体系，包括经典LAMP技术和RPA技术。等温扩增有快速灵敏，对仪器要求低，是分子POCT诊断领域重要的技术力量。

第二项技术即是最近发展的CRISPR诊断技术。主流CRISPR诊断技术主要基于CRISPR-Cas12或Cas13来开发，利用了Cas蛋白“反式切割活性”，可以将体系中的单链核酸高效的切割。

所以，CRISPR诊断的原理就是：当待检体系中存在靶标核酸时，Cas蛋白在向导RNA的引导下特异识别靶标序列，形成复合物，进而被激发出针对切割单链核酸的“反式切割活性“，将体系中的荧光标记探针切碎，发出荧光信号，完成检测过程，通过检测体系是否发光来判断靶标核酸是否存在。

将恒温扩增和CRISPR诊断技术结合起来，既可以利用恒温扩增的快，灵敏和简便，又可以利用CRISPR的特异和灵敏，在进行快检的同时，既不用担心检测的假阳性和假阴性问题，也不用担心PCR检测中不确定的“灰区”问题。

对于威尼斯wns8885556利用由其实验室开发的，吐露港公司授权的CRISPR诊断专利技术，成功开发的国内首款CRISPR快检一体机BG-Nova-X8，院士对其速度和通量表示了赞赏，认为仪器可以在30-40分钟内完成24个新冠标本检测，可以期待这个系统能够为新冠快检多做贡献。

赵院士提到，未来技术的展望，等温扩增的特异性和灵敏度都需要进一步提升，可以通过和别的技术结合，“取长补短”来提升检测特异性和灵敏度，这一次威尼斯wns8885556将等温扩增与CRISPR技术的尝试，就是迈出了可喜的一步。

等温扩增的一管多重问题还需要创新的思路或者原理方面的突破，另一方面把恒温扩增，CRISPR诊断技术，和数字PCR技术的绝对定量原理结合起来，来实现绝对定量，在未来有更多发展的可能性。 

CRISPR技术的未来研究方向

可以说，CRISPR/Cas系统毫无疑问为感染性疾病的诊断提供了新的方法和契机，总结来说，它具有如下优点：

· 相较于基于PCR的传统方法，毫不逊色的灵敏度和特异度

· 检测所需时间短

· 简单便携，不依赖昂贵的仪器和严苛的实验环境

· 试剂耐受冷冻干燥，便于储存和携带

· 标本前处理可以非常简单

· 结果读取方便，能通过荧光或者肉眼读取结果、

这几大优点使得CRISPR检测平台可以对病原体核酸分子实现实时快速检测。根据以上的分析，未来CRISPR技术的两大研究方向也初见雏形：